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原代细胞培养 怎样确定细胞来源

发布时间:2019-07-05 00:28 来源:未知 编辑:admin

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  展开全部原理 将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培 养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。

  1、器材:将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死,置75%酒精泡2—3秒钟(时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内)再用碘酒消毒腹部,取胎鼠带 入超净台内(或将新生小鼠在超净台内)解剖取肝脏,置平皿中。

  3、用手术剪将肝脏剪成小块(1mm2),再用Hank’s液洗三次,转移至小青霉素瓶中。

  4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液,37℃中消化20—40分钟,每隔5分钟振荡一次,或用吸管吹打一次,使细胞分离。

  10、将细胞调整到5×105/ml左右,转移至25ml细胞培养瓶中,37℃下培养。 上述消化分离的方法是最基本的方法,在该方法的基础上,可进一步分离不同细胞。细胞分离的方法各实验室不同,所采用的消化酶也不相同(如 胶原酶,透明质酶等)。

  (二)组织块直接培养法 自上方法第3步后,将组织块转移到培养瓶,贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上,将培养液加至瓶中,培养液勿接触组织块。入37℃静置3—5小时,轻 轻翻转培养瓶,使组织浸入培养液中(勿使组织漂起),37℃继续培养。

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