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表面抗原试剂盒里的酶加到表面抗体里面了对实验结果有影响吗?

发布时间:2019-07-29 18:37 来源:未知 编辑:admin

  目的:对生物学实验Western Blot中常用试剂SDS及免疫组织化学技术组织前处理过程和乙醇对抗原、抗体活性及DNA影响进行定量分析,间接反映其对抗原抗体反应可能造成的实验信息的丢失和错误,并试图寻找替代试剂。方法:1、采用双向免疫扩散实验,通过观察沉淀线及确定抗原效价定量分析SDS处理血清后对血清抗原的影响。2、采用免疫散射比浊技术,定量分析SDS处理血清后对IgA、IgM、IgG抗原的影响。3、采用电化学发光技术,定量分析SDS处理乙肝表面抗原阳性血清后对乙肝表面抗原的影响。4、采用免疫固定电泳技术,分析SDS处理血清后对免疫球蛋白抗原结构的影响。5、采用凝集实验,通过比较凝集效价及凝集强度定量分析免疫组织化学组织前处理过程和所应用试剂处理颗粒型抗原后对颗粒型抗原的影响。6、采用酶联免疫吸附试验,定量分析SDS及乙醇处理乙肝表面抗体阳性血清后对乙肝表面抗体的影响;定量分析SDS对不同类型患者伤寒及卵清抗体的影响有无差异。7、采用荧光定量PCR技术,将DNA模板经SDS及乙醇处理,通过对GAPDH及CRP基因的扩增,比较Ct值,计算实验组与对照组Ct值之差,即△Ct值,及抑制率,定量分析sds及乙醇对dna的影响。8、通过酶联免疫吸附试验及荧光定量pcr技术测定sds及十二烷基麦芽糖苷(ddm)对乙肝表面抗体及dna的影响,并进行比较,探讨ddm在蛋白质提取时,对sds的替代作用。结果:1、双向免疫扩散实验结果显示:对照组抗原效价为1:256,sds37℃实验组抗原效价为1:4,sds100℃实验组抗原已破坏,结果无沉淀线、免疫散射比浊实验结果显示:sds37℃实验组iga、igm、igg较对照组略有上升,sds100℃实验组iga、igg抑制率在90%以上,igm为30%。3、电化学发光实验结果显示:sds37℃实验组乙肝表面抗原抑制率为70%,sds100℃实验组为96%。4、免疫固定电泳技术结果显示:经sds处理后,免疫球蛋白抗原结构被破坏。5、凝集实验结果显示:免疫组织化学技术组织前处理过程对抗原的抑制率为72.2%。各试剂单独处理抗原与对照组相比结果为:75%以上的高浓度乙醇对抗原活性的抑制率约为70%,甲醛抑制率约为20%,二甲苯约为10%。6、酶联免疫吸附试验结果显示:sds对乙肝表面抗体的半数抑制浓度为0.92%(32mmol/l);30%乙醇对hbs

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